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蛋白免疫印迹

蛋白免疫印迹（Western Blot）采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离蛋白质混合物，经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物(NC膜，PVDF膜等)上后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体发生免疫反应，一抗再与酶标记的二抗起反应，经过底物显色以球盟会官网入口特异蛋白质表达水平。

由于Western blot技术服务具有简便，快捷等特点，所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的球盟会官网入口。

球盟会官网入口依托青岛市生物技术药物公共研发平台、经验丰富的科研人员、日趋完善的技术平台，围绕蛋白工程、组学等领域建立了蛋白技术服务体系，致力于为广大科研工作者的研发项目保驾护航，为您提供价格实惠、品质优良、快速高效的技术服务。

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蛋白免疫应印迹（Western Blot）实验服务项目
蛋白质抽提与定量Western Blot
图片分析Western Blot实验服务报告提交

 Western blot实验步骤 

1、Western blot蛋白质提取：根据实验目的的不同选择不同的裂解液，如RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液，同时根据蛋白质提取组分的不同选择不同的方法，如提取核蛋白，细胞质蛋白，膜蛋白等。

2、蛋白定量：根据蛋白质的提取条件不同，可采取不同的定量方法，如bradford法、BCA法等。

3、电泳：依据需要球盟会官网入口蛋白的分子量选取分离胶的浓度，分别配置分离胶和积成胶，凝胶凝固后进行蛋白质上样和电泳。

4、转膜：可采取半干法和湿法转移，当采取半干法转膜时需防止短路：从下到上的顺序：滤纸/PVDF膜/凝胶/滤纸/阴极(bio-rad转膜仪)。

5、封闭：5%脱脂奶粉或5% BSA封闭过夜或室温1小时,孵育时间可根据实验需要进行改变。

6、一抗孵育：5%脱脂奶粉稀释一抗到合适的浓度，与膜室温孵育1小时或4度过夜，孵育时间可参考抗体说明书，并加以优化，一抗孵育后TBST洗膜3次，每次5分钟。

7、二抗孵育：5%脱脂奶粉稀释二抗到合适的浓度，与膜室温孵育1小时，TBST洗膜3次，每次5分钟。

8、显影(ECL法)：将A、B两种底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上，置于压片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒进行曝光，曝光一定时间后取出胶片，浸入显影液中显影，直到出现清晰的蛋白质条带，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定Marker，扫描胶片和Western blot 图片分析。

 Western blot实验送检要求 

新鲜或正确保存的组织、细胞或蛋白样品。

组织样品：每份样品约２５０～５００ｍｇ，１０－１５ｍｇ／ｍｌ；

细胞样品：每份样品约１×１０６～１×１０７　细胞数，浓度＞１μｇ／μｌ；

蛋白样品：裂解样品总蛋白量＞５００μｇ／样品，浓度≥２μｇ／μｌ。

球盟会官网入口秉承“科学 · 独立 · 诚信 · 高效”的服务理念，以专业、专注的态度为您提供精确的球盟会官网入口技术和咨询服务。

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